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答案

B

解析

基因分离定律的实质是：减数分裂形成配子时，等位基因随着同源染色体的分开而分离，进入不同的配子中去。如：当F1基因型为Dd时，减数分裂形成D和d两种配子，且比例为1∶1。

F2表现型的比为3：1，属于性状分离，不能说明分离定律的实质，A错误；F1在减数分裂形成配子时，等位基因随着同源染色体的分开而分离，产生配子的比为1：1，属于分离定律的实质，B正确；F2基因型的比为1：2：1，是产生的配子随机结合形成的，属于结果而不是实质，C错误；测交后代比为1：1，是对分离定律的验证，不是说明基因分离定律实质的，D错误。

故选B。

扩展知识

基因分离定律内容：在生物的体细胞中，控制同一性状的遗传因子成对存在，不相融合；在形成配子时，成对的遗传因子发生分离，分离后的遗传因子分别进入不同的配子中，随配子遗传给后代。

基因分离定律的实质是在减数分裂产生配子的过程中，成对的遗传因子彼此分离。